SOP文件 | 眼部细菌学实验室操作规范
1 目的
规范眼部细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2 适用范围
眼分泌物培养或涂片检查。
3 标本
3.1 标本类型：分泌物及脓液。
3.2标本采集
3.2.1 刮片：表面麻醉，翻转眼睑，暴露睑结膜，以消毒刮刀或虹膜恢复器垂直睑结膜面。轻轻刮取结膜上皮细胞层。可在不同部位刮取，但不要在同一部位反复刮取。
3.2.2 结膜囊标本：无菌结手续以浸肉汤的消毒拭子，在内1／3下穹窿轻擦拭并旋转360度，而后将拭子插入运送管中，2小时内送检。取标本时拭子切勿接触睫毛和睑缘皮肤（防止正常菌群污染）。
3.2.3 角膜标本：
刮片：表面麻醉，用手或开睑器分开眼睑，令眼球固定不动或用固定镊固定，用消毒刮刀或虹膜恢复器取45度角刮取角膜溃疡边缘或进行缘，切勿刮取角膜溃疡之基底部。如怀疑真菌感染时可刮取基底部，但不宜过深。
3.2.4 泪囊标本：
以无菌棉签轻压下睑鼻侧部分(泪囊区)，并向泪小点方向推挤，同时以浸过肉汤的拭子擦取泪小点溢出的脓性分泌物，而后将拭子插入运送管中，2h内送检。
3.3 标本验收
3.3.1 申请单填写完整，应注明标本采集时间、来源、标本标识与清单相符，标识唯一。
3.3.2 标本采集应使用规定的专用拭子与运送管。
3.3.3 拭子应置于运送培养基内，留取时间不得超过2h。
3.3.4 有严格的生物安全防护，标本不能外泄，沾染申请单和容器。
3.3.5 如遇与以上不符标本，必须及时与临床联系，并报告不合格标本拒收的理由，同时记录。
4 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关系列化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定药敏卡、革兰阳性菌鉴定药敏卡、、药敏纸片等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5 细菌鉴定和药敏质控
参见《质量管理程序》。
6 检验步骤
6.1 镜检
革兰（Gram）染色：以无菌拭子采取眼分泌物或刮取物直接涂片，革兰染色后显微镜检查，根据细菌形态，染色特征，即可做出初步报告。
6.2细菌分离培养
6.2.1 培养基选择和标本接种：根据标本来源及临床诊断选择适合的培养条件。
6.2..2 一般培养：将眼分泌物拭子或眼分泌物一接种环以无菌手续，分别接种于哥伦比亚血琼脂平板；同时肉汤(TSB)增菌，置35 ~ 37℃环境中培养18 ~ 24h后观察结果。
6.2.3 特殊培养：对怀疑有苛氧菌感染（淋球菌、嗜血杆菌等）者应以无菌手续采取的眼分泌物加种一块哥伦比亚血琼脂平板和HIVC平板，置5 ~ 10％ CO2环境中培养48h后观察结果。
6.2.4 18 ~ 24h培养无菌生长者，应将所有培养基连续培养24h。
6.2.5 沙眼衣原体、厌氧菌、真菌、结核分枝杆菌、病毒等培养可参照有关章节，选择接种相应的特殊培养基。
对于有意义的分离菌均需要鉴定到种并进行药敏试验。
7 操作流程
8 结果报告
8.1 镜检结果：直接镜检与涂片染色对一般细菌感染、淋球菌感染、衣原体感染、梅毒螺旋体感染、真菌以及结核分枝杆菌感染具有初步诊断意义，可对镜检所见进行描述性报告。如：“找到革兰阳性球菌，形似葡萄球菌”；“找到革兰阴性双球菌(细胞内)，疑似淋病奈瑟菌”。
8.2 培养结果：
8.2.1 阴性结果报告：对于无细菌生长者，报告“无菌生长”；对于首次培养仅有少数或极少数细菌生长者，可能为正常菌群，仅报告革兰染色形态特征，并说明仅有少数或极少数XX菌生长。不做药敏试验。
8.2.2 阳性结果报告：
8.2.2.1 无明确意义的阳性结果报告：同时培养出2种或以上细菌时，应根据涂片及培养结果的一致性，报告优势菌的细菌种名及药敏试验结果。
8.2.2.2 有意义的阳性结果报告：报告细菌种名及药敏试验结果。
9 注意事项
由于外眼部分泌物标本易受到结膜囊部正常菌群的污染，经培养分离的细菌有部分为正常菌群，在培养中难以确定所分离的细菌是否与临床感染有关。因此，需根据所分离细菌情况及时与临床联系，结合临床症状、涂片染色镜检及培养结果是否一致等进行综合分析判断，确定分离细菌是否与临床感染有关，那一种可能为致病菌。
10 临床意义
从眼的解剖学分析，人类体表皮肤及与外界相通的腔道和经常暴露在空气中的部分，习惯上称为外眼。它们包括眼睑、泪囊、结膜、角膜、巩膜等。由于眼泪具有机械的冲洗作用，同时又含有杀菌物质(如溶菌酶)，故泪囊、结膜、巩膜、角膜和前房等通常应是无菌的。但由于某种原因也可致一些细菌的侵入。须指出的是大多数人的结膜上常驻的（正常菌群）细菌有：葡萄球菌（表皮葡萄球菌）、类白喉杆菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌、链球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌等。眼的抵抗力很低，外源微生物可经手、不洁用具、分娩、菌血症、空气污染、隐型眼镜污染、滴眼剂污染、外伤、手术后或简单邻近位置的感染扩散等都可致使一些细菌侵入，造成外眼部感染，从而引起新生儿眼炎，睑缘炎、泪腺炎、结膜炎、角膜炎、巩膜炎、虹膜炎及虹膜睫状体炎、眼内炎、急性眼窝蜂窝织炎等。
12 相关文件及记录表格
JYK-***-WSW*** 质量管理程序